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      技術文章

      淺析探針法PCR檢測試劑盒的原理

      更新時間:2022-06-09 瀏覽次數:220

             探針法PCR檢測試劑盒的原理在于PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。
        常用于熒光免疫法中標記抗原或抗體,亦可用于微環境,如表面活性劑膠束、雙分子膜、蛋白質活性位點等處微觀特性的探測。通常要求探針的摩爾吸光系數大,熒光量子產率高;熒光發射波長處于長波且有較大的斯托克斯位移;用于免疫分析時,與抗原或抗體的結合不應影響它們的活性。
        目前常用的熒光探針有熒光素類探針、無機離子熒光探針、熒光量子點、分子信標等。熒光探針除應用于核酸和蛋白質的定量分析外,在核酸染色、DNA電泳、核酸分子雜交、定量PCR技術以及DNA測序上都有著廣泛的應用。
        探針法PCR檢測試劑盒設備簡單、操作簡便、分析速度快及靈敏度高?;瘜W發光成像分析是將化學發光與成像技術相結合,從而具有分辨率高、多樣品同時檢測、光譜響應范圍寬以及靈敏度高等特點,已廣泛應用于凝膠、蛋白印記及微陣列芯片中的化學發光信號檢測。

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