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      技術文章

      轉基因玉米品系Bt11核酸檢測試劑盒使用方法

      更新時間:2023-09-12 瀏覽次數:147

      轉基因玉米品系Bt11核酸檢測試劑盒使用方法:

      測定法的靈敏度來自作為報告的酶。酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。

      1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

       12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

       6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

       3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

       1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

      2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|

      3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

      4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

      5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

      7. 溫育:操作同3。

      8. 洗滌:操作同5。

      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

      11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。



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