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      技術文章

      馬動脈炎病毒(EAV)核酸檢測試劑盒反應的特異性決定因素

      更新時間:2021-01-07 瀏覽次數:403

      馬動脈炎病毒(EAV)核酸檢測試劑盒反應的特異性決定因素:
      ①引物與模板DNA特異正確的結合;
      ②堿基配對原則;
      ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
      ④靶基因的特異性與保守性。
      其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
      (2) 靈敏度高
      PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
      (3) 簡便、快速
      PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
      (4) 對標本的純度要求低
      不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

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