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      技術文章

      皰疹病毒PCR檢測試劑盒操作反應五要素

      更新時間:2021-03-03 瀏覽次數:347

      皰疹病毒PCR檢測試劑盒操作反應五要素:

      參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

      引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

      ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

      ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

      ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

      ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

      ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

      ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

      ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

      引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

       兔子免疫球蛋白A(IgA)elisa試劑盒 
      兔子可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)elisa試劑盒
      兔子可溶性細胞間粘附分子1(sICAM-1)elisa試劑盒
      兔子可溶性E選擇素(sE-selectin)elisa試劑盒
      兔子巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa試劑盒
      兔子堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)elisa試劑盒 
       兔子免疫球蛋白M(IgM)elisa試劑盒 
      兔子甲狀腺素(T4)elisa試劑盒
      兔子基質金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)elisa試劑盒
      兔子基質金屬蛋白酶9(MMP-9)elisa試劑盒
      兔子基質金屬蛋白酶4(MMP-4)elisa試劑盒
      兔子基質金屬蛋白酶5(MMP-5)elisa試劑盒
      兔子睪酮(T)elisa試劑盒
      兔子肝細胞生長因子(HGF)elisa試劑盒
      兔子γ干擾素(IFN-γ)elisa試劑盒 
      兔子端粒酶(TE)elisa試劑盒
      兔子單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa試劑盒
      兔子促腎上腺皮質激素(ACTH)elisa試劑盒
      兔子促卵泡素(FSH)elisa試劑盒
      兔子促甲狀腺素(TSH)elisa試劑盒
      兔子雌二醇(E2)elisa試劑盒
      兔子腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)elisa試劑盒
      兔子表皮生長因子(EGF)elisa試劑盒 
      兔子白血病抑制因子受體(LIFR)elisa試劑盒

       

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