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      產品名稱:

      線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測試盒微量法

      產品廠地: 上海市
      訪問次數: 293
      更新時間: 2022-05-24
      描述:線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測試盒微量法公司正在出售的產品:雙歧桿菌瓊脂培養基 英文名稱:Bifidobacterium BS Medium 產品規格:250g 含糖牛肉湯培養基 英文名稱:Beef Broth Medium(with Sugar) 產品規格:250g 石蕊牛奶培養基 英文名稱:Litmus Milk Medium 產品規格:250g 乳酸桿菌選擇性肉湯 英文名稱: 產品規格

      產品介紹

      品牌其他品牌貨號BK-01S6579

      本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

      產品名稱

      規格

      檢測方法

      貨號

      線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測試盒微量法

      100管/96樣

      微量法

      BK-01S6579

      商品介紹:

      測定意義:

      ICDHmEC 1.1.1.41)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞的線粒體中,在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸,同時將NAD+ 還原為NADH,是三羧酸循環的限速酶之一,其催化的反應是細胞NADH主要來源之一。

      測定原理

      ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH,導致340nm處光吸收上升。

      需自備的儀器和用品

      紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

      試劑組成和配制:

      提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

      試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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      實驗結果判斷我有妙招:

      1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。

      2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。

      3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。

      4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。

      與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:

      ① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。

      ② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。

      ③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。

      ④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。

      ⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

       

      操作步驟:

      1. 樣品的準備:

      a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

      b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

      d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

      e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

      2. 試劑盒的準備工作:

      a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

      注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

      b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

      c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

      5次 蛋白膠中量回收試劑盒 Protein Gel Midi-Extraction Kit 4℃保存

      2 ug pYIP5 pYIP5 低溫運輸,-20℃保存

      5次 大提柱式Ti質粒DNAout  

      2 ug pET-32 Ek/LIC pET-32 Ek/LIC 低溫運輸,-20℃保存

      硝酸鐵瓊脂 Ferric nitrate agar 250g

      1瓶 AM細胞株 AM 低溫運輸和保存

      1個 4mLDNA超濾離心管(300-500KD)  

      100次 總肽過氧化物檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

      250ML MES Lysis Buffer with Triton   MES Lysis Buffer with Triton   常溫保存

      100次 轉Lectin基因植物鑒定PCR Mix (Lectin 基因) Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

      2 ug pMBP- P pMBP- P 低溫運輸,-20℃保存

      線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)測試盒微量法Mouse Anti-human IgM/PE  PE標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.1ml

      Phospho-Rb (Thr821)  磷酸化視網膜母細胞瘤相關蛋白1抗體 規格: 0.1ml

      HRASLS2  HRAS樣抑制因子2抗體 規格: 0.2ml

      CROT/COT  過氧化物體肉堿?;D移抗體 規格: 0.2ml

      phospho-MAPK8/MAPK9( Thr183+Tyr185)  磷酸化氨基末端激2抗體 規格: 0.1ml

      phospho-MEK1/MAP2K1(Thr292)  磷酸化絲裂原活化蛋白激1抗體 規格: 0.1ml

      TFPI/LACI  組織因子途徑抑制劑抗體 規格: 0.1ml

      Goat anti-human IgG whole serum  羊抗人IgG抗清 規格: 1ml

      Mouse Anti-Bov IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml

      ELYS  轉錄因子ELYS蛋白抗體 規格: 0.2ml

      DKK3  抑蛋白DKK3抗體 規格: 0.1ml

      COX10  氧化10抗體 規格: 0.1ml

       


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