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產品介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | BK-01S6585 |
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本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!
產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6585 |
商品介紹：
測定意義: MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，線粒體中MDH是TCA循環的關鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細胞多種生理活動中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬穿梭系統、活性氧代謝和抗病性等。根據不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細胞中，NAD-MDH分布于細胞質和線粒體中。 測定原理： MDHm催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導致340nm處光吸收下降。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招：
1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩定試劑的分類及要求：
① 易揮發、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發生反應的物質要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準備：
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。
e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據待檢測樣品(包括標準品) 數量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現配現用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現稀釋現使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
1瓶 PC-3細胞株 PC-3 低溫運輸和保存
CATC瓊脂 CATC Agar 250g
5g Chloramphenicol 室溫保存
50T 阿留申病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
1g 乙酰丁香酮 Acetosyringone 室溫保存
2 ug pBBR1-MCS5 pBBR1-MCS5 低溫運輸，-20℃保存
1g 溶壁干粉 Lywallzyme Powder -20℃干燥保存(3個月以上)，或4℃干燥保存(3個月以內)
2 ug pET-16b pET-16b 低溫運輸，-20℃保存
LAMVAB瓊脂 LAMVAB Agar 250g
10g 尿酸 Uric Acid 室溫保存
50T 轉基因植物35S基因PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
線粒體蘋果酸脫氫酶（MDHm）測試盒微量法Cripto-1(NT) 畸胎瘤衍化生因子抗體(N端) 規格: 0.2ml
APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體 規格: 0.1ml
ALS2CR4 肌萎側索硬化癥相關蛋白4抗體 規格: 0.2ml
MEK1/MAPKK1/MEKK1 MEK1/MAPKK1抗體(N-端) 規格: 0.1ml
GIP 胃泌素抑制肽抗體 規格: 0.2ml
Cofilin 肌動蛋白結合蛋白CFL抗體 規格: 0.1ml
WIG-1/PAG608 野生型P53誘導基因1抗體 規格: 0.1ml
SCEL SCEL蛋白抗體 規格: 0.2ml
FBXO11 F-box蛋白家族FBXO11抗體 規格: 0.2ml
PAX1 配對盒基因1抗體 規格: 0.1ml
IL-3R alpha/CD123 白介素3受體a鏈抗體 規格: 0.2ml
phospho-CDC27/ANAPC3(Ser427) 磷酸化后期促進復合蛋白3抗體 規格: 0.1ml
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