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      產品名稱:

      輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法

      產品廠地: 上海市
      訪問次數: 554
      更新時間: 2022-05-19
      描述:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法公司正在出售的產品:IgG-Fc片段低親和力受體Ⅲb(FcγR3B)重組蛋白Recombinant Fc Fragment Of IgG Low Affinity IIIb Receptor (FcgR3B)Juxtanodin蛋白(JN)重組蛋白Recombinant Juxtanodin (JN)Kruppel樣因子4(KLF4)重組蛋白Recomb

      產品介紹

      品牌其他品牌貨號BK-S01321

      本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結果,提供原始數據!

      產品名稱規格檢測方法貨號
      輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法100管/48樣微量法BK-S01321

      商品介紹:

      測定意義
      輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
      測定原理
      分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。
      需自備的儀器和用品
      可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

      試劑組成和配制:

      提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。

      試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。

      試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
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      實驗結果判斷我有妙招:
      1、定量測定結果根據標準曲線計算樣品中待測物的含量。
      2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
      3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
      4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
      與您分享常用不穩定試劑的分類及要求:
      ① 易揮發、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
      ② 與水蒸氣,水發生反應的物質要密封,并遠離水源保存。
      ③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
      ④ 與二氧化碳反應的物質要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
      ⑤ 易揮發或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。

      操作步驟:

      1. 樣品的準備:

      a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。

      b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。

      d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經足夠用于后續檢測。

      e. 根據蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。

      2. 試劑盒的準備工作:

      a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據待檢測樣品(包括標準品) 數量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

      注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。

      b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現配現用。

      c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現稀釋現使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。

      AHA3    AHA3抗體(擬南芥)    

      Phospho-ATP1A1 (Ser23)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體    

      phospho-ASK1 (Ser83)    磷酸化細胞凋亡信號調節激酶1抗體    

      AADACL1    中性酯水解酶1抗體    

      Astrocyte    人星形膠質細胞抗體    

      Aldolase A    醛縮酶A抗體    

      Annexin VI    膜粘連蛋白6抗體    

      beta-Amyloid(25-35)    β淀粉樣肽(25-35)抗體    

      Angiotensin I    血管緊張素I抗體    

      Adrenomedullin    腎上腺髓質素抗體(N端20肽)    

      Arfaptin 2    ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體    

      AVPR2    加壓素受體2抗體    

      ASC    凋亡相關斑點樣蛋白ASC抗體    

      Afadin    絲狀肌動蛋白結合蛋白抗體    

      Antithrombin III     抗3抗體    

      Serum albumin (3F4)    人血清白蛋白單克隆抗體    

      CUB帶狀瘡疹透明區樣域蛋白1(CUZD1)重組蛋白    Recombinant CUB And Zona Pellucida Like Domains Protein 1 (CUZD1)    

      C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 11, Member A (CLEC11A)    

      C-型凝集素域家族2成員C(CLEC2C)重組蛋白    Recombinant C-Type Lectin Domain Family 2, Member C (CLEC2C)    

      Dermokine蛋白(DMKN)重組蛋白    Recombinant Dermokine (DMKN)    

      Dickkopf相關蛋白2(DKK2)重組蛋白    Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)    

      Discs大同源物關聯蛋白5(DLGAP5)重組蛋白    Recombinant Discs, Large Homolog Associated Protein 5 (DLGAP5)    

      EGF樣域蛋白6(EGFL6)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 6 (EGFL6)    

      EGF樣域蛋白7(EGFL7)重組蛋白    Recombinant EGF Like Domain Protein, Multiple 7 (EGFL7)    

      Enah/Vasp樣蛋白(EVL)重組蛋白    Recombinant Enah/Vasp Like Protein (EVL)    

      FK506結合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白    Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)    

      輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒微量法FMS樣Flt3)重組蛋白    Recombinant FMS Like Tyrosine Kinase 3 (Flt3)    

      GATA結合蛋白3(GATA3)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 3 (GATA3)    

      GATA結合蛋白4(GATA4)重組蛋白    Recombinant GATA Binding Protein 4 (GATA4)    

      G蛋白偶聯受體家族C5組成員A(GPRC5A)重組蛋白    Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)    

      HtrA肽酶1(HTRA1)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 1 (HTRA1)    

      HtrA4(HTRA4)重組蛋白    Recombinant HtrA Serine Peptidase 4 (HTRA4)    

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