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      產品名稱:

      輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法

      產品廠地: 上海市
      訪問次數: 489
      更新時間: 2022-05-19
      描述:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法的相關產品:6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒6磷酸葡糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒微量法6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測試盒紫外分光光度法胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒微量法

      產品介紹

      品牌其他品牌貨號BK-01S6322

      特別提醒:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。

      產品名稱:輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法
      產品規格:50管/24樣
      檢測方法:可見分光光度法
      產品貨號:BK-01S6322
      產品分類:
      商品介紹:

      測定意義
      輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。
      測定原理
      分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。
      需自備的儀器和用品
      可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

      所需的儀器和用品:

      可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

      四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

      建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

      樣本和試劑浪費!

      1、樣本制備

      ① 組織樣本:

      取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

      勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

      【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取


      ② 細菌/細胞樣本:

      先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

      提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

      12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

      【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

      4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

      QQ截圖20220307153537.png

      實驗方法學:
      一、肝素的配制:
      市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
      肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
      二、血液樣本的收集:
      全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
          1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
      2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實驗室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
      選擇抗凝的注意點:
      ①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
      ②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
             ③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
             ④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
      用于測定。

      甲醛脫氫酶(FDH)測試盒    甲醛脫氫酶(FDH)測試盒微量法    微量法    

      甲醛脫氫酶(FDH)測試盒    甲醛脫氫酶(FDH)測試盒紫外分光光度法    紫外分光光度法    

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      肌酸激酶(CK)測試盒    肌酸激酶(CK)測試盒微量法    微量法    

      phospho-GEF H1 (Ser886)    磷酸化Rho鳥苷酸交換因子2抗體    

      phospho-Afadin (Ser1721)    磷酸化絲狀肌動蛋白結合蛋白抗體    

      ARPC1A    肌動蛋白相關蛋白2/3亞型1A抗體    

      ANKRD32    錨蛋白重復結構域蛋白32抗體    

      ATXN7L3B    共濟失調7樣蛋白3B抗體    

      POP1    感染性蛋白白1抗體    

      ASB5    含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族5抗體    

      ABP1    植物生長激素ABP1抗體    

      phospho-ATF2 (Thr55)    磷酸化活化復制因子2抗體    

      ADRA1B    alpha 1腎上腺素能受體B抗體    

      Bcl-2 alpha    Bcl2 alpha蛋白抗體    

      BAT5    白細胞抗原B相關轉錄蛋白5抗體    

      BTBD1    BTB/POZ結構域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉錄蛋白8)抗體    

      BCL7B    BCL7B蛋白抗體    

      輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒可見分光光度法BNC2    堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體    

      BCL7C    B細胞白血病/淋巴瘤蛋白7抗體    

      BSCL2    先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體(常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17)    

      BTG1    B細胞遷移基因1抗體    

      BEAN1    脊髓小腦共濟失調蛋白BEAN1抗體    

      注意事項:

      1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

      2、對照管只需要做一管。

      3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。

      4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?

      對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

      若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

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